NORTHERN BLOT EN DIABETES

El gen obeso (ob) es el que produce una mutación hereditaria de la diabetes en ratones ha sido recientemente aislado a través de la clonación posicional. Mediante NORTHERN BLOT se analizo en humanos utilizando el fragmento de ADNc ob humano clonado como sonda, se identificó un único ARN mensajero (ARNm) de 4,5 kb de tamaño que se encuentra en abundancia en los tejidos adiposos obtenidos a partir de piel subcutánea, retroperitoneal, perilinfática, y almohadillas de grasa intestinales pero, ninguna cantidad significativa de mRNA obestaba presente en el cerebro, corazón, pulmón, hígado, estómago, páncreas, bazo, intestino delgado, riñón, próstata, testículo, colon, o músculo esquelético. El nivel de ARNm de OB en el tejido adiposo varía de una región a otra, incluso en el mismo individuo. Además, en el tejido adiposo humano, la expresión del gen ob ocurrió en adipocitos maduros en lugar de en las células del estroma-vascular.

BIBLIOGRAFÍA:

http://diabetes.diabetesjournals.org/content/44/7/855.short

ANÁLISIS DE ADN EN DIABETES MEDIANTE PCR
TEMA:

Crónica inflamación vascular en pacientes con diabetes tipo 2, Biopsia endotelial y análisis RT-PCR
OBJETIVO: 

Desempeñar un papel en el desarrollo de complicaciones macrovasculares en pacientes diabéticos. En este estudio, examinamos la asociación de la expresión endotelial de dos mediadores de la inflamación, del receptor para el producto final de glicación avanzada (RAGE) y MCP-1 (MCP-1), con la diabetes tipo 2 mediante novela biopsia endotelial y técnicas de RT-PCR.
MUESTRA:

Muestras endoteliales se obtienen de la aorta de 12 pacientes con diabetes tipo 2 y 23 sujetos de control que se sometieron a cateterismo cardíaco para el síndrome de dolor en el pecho o corazón seguimiento.
TIPO DE ÁCIDO NUCLÉICO:

ADNc
GEN A AMPLIFICAR: 

Oligo dT24 y sitios de policlonación
(5'-ATATGGATCCAAGCTTCGAATTCGTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT-3 ').
PCR: 

RT-PCR
VIZUALIZACIÓN: 

EFO

BIBLIOGRAFÍA:

http://care.diabetesjournals.org/content/28/2/379.full

DIAGNÓSTICO MOLECULAR DE LA DIABETES

El diagnóstico molecular se lleva a cabo por medio de la PCR, empleando ADN extraído del paciente, posteriormente, se amplifica el gen candidato empleando iniciadores (primers) específicos de éste gen, el cual se le considera un marcador molecular. Un marcador molecular se define como un gen o una proteína que presenta ciertas características como: a) participa sólo en una vía de señalización, b) presenta polimorfismos o c) variantes génicas se expresan en cierta condición o enfermedad, sólo por mencionar algunas características. Por ejemplo, se logró identificar genes/proteínas que participan tanto en la secreción de insulina en respuesta a una concentración de glucosa plasmática, como en la vía de señalización intracelular para la acción de esta hormona, por lo que cada uno de esos genes pudiera ser un gen candidato para considerarlo como un marcador molecular .

Así pues, los estudios que demuestran claramente que un gen presenta una variante con un efecto significativo sobre el fenotipo relacionado con la enfermedad, indican la susceptibilidad de un gen. Además, las variantes de genes candidatos que pudieran desarrollar diabetes también han sido estudiadas, analizaron la región telomérica del cromosoma 2q (2q33-2q37) en 330 México-Americanos, destacando la presencia del gen CAPN10. indicaron que en la misma población México-Americana, el gen que codifica para la calpaina-10 registró diferentes polimorfismos (SNP-43, SNP-19 y SNP-63) y estos se relacionaron con riesgo a desarrollar DT2. Por su parte, Lyssenko y cols analizaron los SNP-43 y SNP-44 del gen CAPN10 como posible candidato para predecir el desarrollo de la diabetes. Los resultados demostraron que a partir de estos SNP’s en CAPN10 y en otro gen conocido como PPARγ se puede predecir la presencia de DT2 en personas aparentemente sanas. Anteriormente, Parikh y Croop y Memisoglu y cols indicaron que la sustitución aminoacídica de la Pro12Ala en la proteína PPARγ ésta relacionada con mayor riesgo de desarrollar DT2, mientras que la Ala12Pro tiene mayor sensibilidad hacia la insulina, es decir, disminuye el riesgo de desarrollar DT2.

BIBLIOGRAFÍA:

http://www.posgradoeinvestigacion.uadec.mx/AQM/No.%202/AQM2marcadoresmoleculares.html

DIAGNÓSTICO CONFIRMATORIO DE DIABETES MELLITUS

El método de elección para pesquisar y diagnosticar la diabetes tipo 2 en adultos es la glicemia
en ayunas en sangre venosa determinada en el laboratorio.
la hemoglobina glicosilada (HbA1c), mayor o igual a 6,5%, como otro criterio diagnóstico.

La insulinemia bajo ninguna circunstancia debe utilizarse para el diagnóstico.

El diagnóstico de diabetes tipo 2 se realiza en cualquiera de las siguientes situaciones:

•  Síntomas clásicos de diabetes (polidipsia, poliuria, polifagia y baja de peso) y una glicemia en cualquier momento del día mayor o igual a 200 mg/dl, sin relación con el tiempo transcurrido desde la última comida. 
• Glicemia en ayunas mayor o igual a 126 mg/dl. Debe confirmarse con una segunda glicemia ≥126 mg/dl, en un día diferente. (Ayuno se define como un período sin ingesta calórica de por lo menos ocho horas). 
• Glicemia mayor o igual a 200 mg/dl dos horas después de una carga de 75 g de glucosa durante una PTGO

BIBLIOGRAFÍA:

http://web.minsal.cl/portal/url/item/72213ed52c3e23d1e04001011f011398.pdf

http://www.galenusrevista.com/Nuevas-guias-para-el-diagnostico.html

TAMIZAJE PARA EL DIAGNÓSTICO DE LA DIABETES MELLITUS

La glucemia en ayunas es la prueba más sencilla para el tamizaje oportunístico de DM en personas asintomáticas, pero la mejor manera para diagnosticar la diabetes en el tamizaje se realiza mediante la medición de la glucemia 2 horas post carga de glucosa.

Es muy importante tener en cuenta que una prueba de tamizaje solo indica una alta probabilidad de tener DM y debe ser confirmada con una prueba diagnóstica.

¿A quién se le debe practicar una prueba de tamizaje para DM?
1. Cada tres años a las personas mayores de 45 años
2. Una vez al año a las personas que tengan uno o más de los factores de riesgo que se mencionan a continuación:

• IMC mayor de 27 kg/m2 o menos si hay obesidad abdominal 
• Familiares diabéticos en primer grado de consanguinidad 
• Procedencia rural y urbanización reciente 
• Antecedentes obstétricos de DMG y/o de hijos macrosómicos (peso al nacer > 4 kg) 
• Menor de 50 años con enfermedad coronaria 
• Hipertenso con otro factor de riesgo asociado 
• Triglicéridos mayores de 150 mg/dl con HDL menor de 35 mg/dl 
• Alteración previa de la glucosa 
• Diagnóstico de síndrome metabólico 

BIBLIOGRAFÍA:

http://www.scielosp.org/pdf/rpsp/v27n3/a05v27n3

http://www.revistaalad.com/website/articulo.asp?id=13&pagina=2

ALTERACIONES EN LA TRADUCCIÓN DE LA DIABETES MELLITUS

Existen algunos genes que alteran la síntesis directa de proteínas y estas a su vez van a ser las causantes de varias manifestaciones o causas de la Diabetes:

• Rica en Leucina proteína G del receptor acoplado 5 (LGR5): Es una proteína que se une con integrinas. Este es un gen marcador intestinal que se expresa en las células del intestino.
• Receptores de la melatonina 1B: Receptores de LGR5 que se expresan en las células beta del páncreas.
• Transparin 8 (TSPAN8): Son proteínas que contienen dominios transmembrana 4, este gen y el LGR5 se encuentran en el mismo locus, afectan a las células beta pancreáticas.
• Wolfram síndrome de genes, también llamada Diabetes Insípida, Diabetes Mellitus (WFS1): Es una glicoproteína de membrana, que actúa en la disfunción de kas células beta pancreáticas.

BIBLIOGRAFÍA:

http://themedicalbiochemistrypage.org/es/diabetes-sp.php#type2genetics

ALTERACIÓN DE LA TRANSCRIPCIÓN EN LA DIABETES MELLITUS TIPO II

Existen varios genes que influyen en el desarrollo de la Diabetes Mellitus y que afectan el proceso de la transcripción genética, entre estos podemos citar:

• Hematopoietically de Homeobox (HHEX): Es un represor de la transcripción en las células hepáticas, afecta provocando disfunción de las células beta y por ende, el deterioro de la secreción de insulina.
• JAZF1 (TIP27): Es un represor transcripcional que afecta también a la función de las células beta.
• Factor de Kruppel (KLF14): Pertenece a la familia de factores de transcripción de dedos de zinc.
• TCF7L2: Es un factor de transcripción de proteínas que participan en la vía de señalización del Wnt, los polimorfismos en este gen tienen mucha relación con el desarrollo de la diabetes mellitus.

BIBLIOGRAFIA:

Michael W. King.Medical Biochemestry. Diabetes: Tipo I y Tipo II. 2015 (02/05/2015). Disponible en: http://themedicalbiochemistrypage.org/es/diabetes-sp.php